恶臭假单胞菌A1在番茄青枯病生物防治中的应用
发布时间：2020-12-01 15:19
番茄青枯病是番茄栽培过程中的一个重要细菌病害,其病原物青枯劳尔氏菌经土壤传播,是病害防治中的一个难题。本实验室前期分离到一株对番茄青枯菌有抑菌活性,并且具有一定防效的恶臭假单胞菌A1。本文拟探索能否利用合理的技术方案增强对番茄青枯病的防治效果,并研究A1菌株合成的抑菌活性物质是什么:(1)在灌根接种试验中,施用5 mL不同浓度的恶臭假单胞菌A1,虽然每种施用浓度都可以减轻青枯病的发生,但在OD600=0.6施用浓度时,对青枯病的防治效果最好。7天后比对照的病情指数低37%,过高浓度施用后防治效果反而有所下降。(2)恶臭假单胞菌A1与生防枯草芽孢杆菌K1没有相互拮抗作用,将两种生防菌混合施用后,增强了对番茄青枯病的防效。防治效果最好的比例是2:1,病害发生延缓4天,在所观察的各个时间点,病情指数都是最低的。处理后第11天,其它处理的病情指数都达到或接近100%时,2:1比例混合的处理的病情指数只有78%。(3)恶臭假单胞菌A1对番茄成株期的生长有促进作用,但高浓度的菌液抑制种子发芽率。(4)为了解恶臭假单胞菌A1所产生的抑菌活性物质,本文构建了 400个Tn5随机插入突变体,其中MATE...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
1.1 茄科青枯病的发生与防治
1.2 生物防治在青枯病防控中的应用进展
1.2.1 假单胞菌（Pseudomonas）
1.2.2 芽孢杆菌（Bacillus）
1.2.3 无致病力青枯菌
1.2.4 噬菌体
1.3 本研究的目的意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 供试菌株和质粒
2.1.2 主要仪器
2.1.3 培养基及抗生素
2.1.4 植株材料
2.2 试验方法
2.2.1 恶臭假单胞菌A1与枯草芽孢杆菌K1的最适施用浓度
2.2.2 恶臭假单胞菌A1与枯草芽孢杆菌K1的相互拮抗检测
2.2.3 恶臭假单胞菌A1和枯草芽孢杆菌K1混合菌液的防治试验
2.2.4 生防菌对番茄出芽和生长的影响
2.2.5 Tn5转座子插入突变的筛选
2.2.6 抑菌活性丧失突变体的功能验证
3 结果
3.1 生防恶臭假单胞菌A1的最佳施用浓度
3.2 生防恶臭假单胞菌A1与枯草芽孢杆菌K1的相互拮抗检测
3.3 生防枯草芽孢杆菌K1的最佳施用浓度
3.4 恶臭假单胞菌A1与枯草芽孢杆菌K1混合后增强了对番茄青枯病的防治效果
3.5 恶臭假单胞菌A1和枯草芽孢杆菌K1在高浓度条件下影响番茄发芽率
3.6 恶臭假单胞菌A1抑菌肽突变体筛选
4 分析与讨论
参考文献
附录A 大肠杆菌热转化
附录B 大肠杆菌质粒提取（天根生物公司试剂盒）
附录C DNA回收纯化（天根生物公司试剂盒）
附录D SDS-PAGE电泳所需试剂
附录E 大肠杆菌感受态的制备
致谢
【参考文献】：
期刊论文--------
[1]青枯雷尔氏菌拮抗放线菌的筛选及其抗菌活性物质的分离[J]. 罗文建,刘雨虹,施河丽,谭军,王瑞,赵秀云,向必坤. 中国烟草科学. 2017(02)
[2]番茄青枯病植物疫苗胶悬菌剂的制备及其对病害的防治效果[J]. 郑雪芳,朱育菁,刘波,葛慈斌. 植物保护. 2017(02)
[3]青枯雷尔氏菌噬菌体研究进展[J]. 苏靖芳,于浩,刘俊杰,郭兆奎,孙宏伟,顾刚,王光华. 土壤与作物. 2017(01)
[4]几种生物药剂对烟草青枯病防效的研究[J]. 杨兴平,左锐,潘首慧,李沛柏,吴洪林,李登发. 现代园艺. 2017(03)
[5]不同药剂对海南茄子青枯病病原菌的室内药效测定[J]. 周运瑶,张斌,林海秀,罗宏伟,李珍,丘凤莲,张英樊,王沛政. 海南热带海洋学院学报. 2016(05)
[6]番茄青枯病生防芽胞杆菌的筛选与鉴定[J]. 郑雪芳,刘波,朱育菁,葛慈斌,刘国红. 中国生物防治学报. 2016(05)
[7]烟草青枯病拮抗菌株X-60的分离鉴定及其表型组学分析[J]. 汪汉成,王茂胜,黄艳飞,王进,商胜华,张长青. 植物病理学报. 2016(03)
[8]假单胞菌产生的抗生素[J]. 张力群,张俊威. 中国生物防治学报. 2015(05)
[9]放线菌混合菌剂对西瓜枯萎病的防治作用研究[J]. 甘良,蓝星杰,戴蓬博,刘继红,王阳,宗兆锋. 中国生物防治学报. 2015(04)
[10]莆田市番茄青枯病流行影响因子及防治关键技术[J]. 蔡瑜,陈祖祯. 现代农业. 2015(06)
[1]Identification of a Pseudomonas putida as biocontrol agent for tomato bacterial wilt disease[J] . Dongling Sun,Tao Zhuo,Xun Hu,Xiaojing Fan,Huasong Zou. Biological Control . 2017
[2]Enhanced in planta Fitness through Adaptive Mutations in EfpR, a Dual Regulator of Virulence and Metabolic Functions in the Plant Pathogen Ralstonia solanacearum[J] . Anthony Perrier,Rémi Peyraud,David Rengel,Xavier Barlet,Emmanuel Lucasson,Jér?me Gouzy,Nemo Peeters,Stéphane Genin,Alice Guidot. PLOS Pathogens . 2016 (12)
[3]Escaping Underground Nets: Extracellular DNases Degrade Plant Extracellular Traps and Contribute to Virulence of the Plant Pathogenic Bacterium Ralstonia solanacearum[J] . Tuan Minh Tran,April MacIntyre,Martha Hawes,Caitilyn Allen. PLOS Pathogens . 2016 (6)
[4]Evaluation of biological control agents against Ralstonia wilt on ginger[J] . Wei Yang,Quan Xu,Hong-Xia Liu,Yun-Peng Wang,Yong-Ming Wang,He-Tong Yang,Jian-Hua Guo. Biological Control . 2012 (3)
[5]Host recognition and integration of filamentous phage ?RSM in the phytopathogen, Ralstonia solanacearum[J] . Ahmed Askora,Takeru Kawasaki,Shoji Usami,Makoto Fujie,Takashi Yamada. Virology . 2008 (1)
[6]Highly specific PCR-diagnosis to determine Pseudomonas solanacearum strains of different geographical origins[J] . F. Hartung,R. Werner,H.-P. Mühlbach,C. Büttner. TAG Theoretical and Applied Genetics . 1998 (6-7)
[7]Thermal asymmetric interlaced PCR: automatable amplification and sequencing of insert end fragments from P1 and YAC clones for chromosome walking[J] . Yao-Guang Liu,Robert F. Whittier. Genomics . 1995 (3)
[8]Four new derivatives of the broad-host-range cloning vector pBBR1MCS, carrying different antibiotic-resistance cassettes[J] . Michael E. Kovach,Philip H. Elzer,D. Steven Hill,Gregory T. Robertson,Michael A. Farris,R.Martin Roop,Kenneth M. Peterson. Gene . 1995 (1)
[9]Biological control of bacterial wilt caused by Pseudomonas solanacearum in India with antagonistic bacteria[J] . C. S. Anuratha,S. S. Gnanamanickam. Plant and Soil . 1990 (1)
本文编号：2894913
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
1.1 茄科青枯病的发生与防治
1.2 生物防治在青枯病防控中的应用进展
1.2.1 假单胞菌（Pseudomonas）
1.2.2 芽孢杆菌（Bacillus）
1.2.3 无致病力青枯菌
1.2.4 噬菌体
1.3 本研究的目的意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 供试菌株和质粒
2.1.2 主要仪器
2.1.3 培养基及抗生素
2.1.4 植株材料
2.2 试验方法
2.2.1 恶臭假单胞菌A1与枯草芽孢杆菌K1的最适施用浓度
2.2.2 恶臭假单胞菌A1与枯草芽孢杆菌K1的相互拮抗检测
2.2.3 恶臭假单胞菌A1和枯草芽孢杆菌K1混合菌液的防治试验
2.2.4 生防菌对番茄出芽和生长的影响
2.2.5 Tn5转座子插入突变的筛选
2.2.6 抑菌活性丧失突变体的功能验证
3 结果
3.1 生防恶臭假单胞菌A1的最佳施用浓度
3.2 生防恶臭假单胞菌A1与枯草芽孢杆菌K1的相互拮抗检测
3.3 生防枯草芽孢杆菌K1的最佳施用浓度
3.4 恶臭假单胞菌A1与枯草芽孢杆菌K1混合后增强了对番茄青枯病的防治效果
3.5 恶臭假单胞菌A1和枯草芽孢杆菌K1在高浓度条件下影响番茄发芽率
3.6 恶臭假单胞菌A1抑菌肽突变体筛选
4 分析与讨论
参考文献
附录A 大肠杆菌热转化
附录B 大肠杆菌质粒提取（天根生物公司试剂盒）
附录C DNA回收纯化（天根生物公司试剂盒）
附录D SDS-PAGE电泳所需试剂
附录E 大肠杆菌感受态的制备
致谢
【参考文献】：
期刊论文--------
[1]青枯雷尔氏菌拮抗放线菌的筛选及其抗菌活性物质的分离[J]. 罗文建,刘雨虹,施河丽,谭军,王瑞,赵秀云,向必坤. 中国烟草科学. 2017(02)
[2]番茄青枯病植物疫苗胶悬菌剂的制备及其对病害的防治效果[J]. 郑雪芳,朱育菁,刘波,葛慈斌. 植物保护. 2017(02)
[3]青枯雷尔氏菌噬菌体研究进展[J]. 苏靖芳,于浩,刘俊杰,郭兆奎,孙宏伟,顾刚,王光华. 土壤与作物. 2017(01)
[4]几种生物药剂对烟草青枯病防效的研究[J]. 杨兴平,左锐,潘首慧,李沛柏,吴洪林,李登发. 现代园艺. 2017(03)
[5]不同药剂对海南茄子青枯病病原菌的室内药效测定[J]. 周运瑶,张斌,林海秀,罗宏伟,李珍,丘凤莲,张英樊,王沛政. 海南热带海洋学院学报. 2016(05)
[6]番茄青枯病生防芽胞杆菌的筛选与鉴定[J]. 郑雪芳,刘波,朱育菁,葛慈斌,刘国红. 中国生物防治学报. 2016(05)
[7]烟草青枯病拮抗菌株X-60的分离鉴定及其表型组学分析[J]. 汪汉成,王茂胜,黄艳飞,王进,商胜华,张长青. 植物病理学报. 2016(03)
[8]假单胞菌产生的抗生素[J]. 张力群,张俊威. 中国生物防治学报. 2015(05)
[9]放线菌混合菌剂对西瓜枯萎病的防治作用研究[J]. 甘良,蓝星杰,戴蓬博,刘继红,王阳,宗兆锋. 中国生物防治学报. 2015(04)
[10]莆田市番茄青枯病流行影响因子及防治关键技术[J]. 蔡瑜,陈祖祯. 现代农业. 2015(06)
[1]Identification of a Pseudomonas putida as biocontrol agent for tomato bacterial wilt disease[J] . Dongling Sun,Tao Zhuo,Xun Hu,Xiaojing Fan,Huasong Zou. Biological Control . 2017
[2]Enhanced in planta Fitness through Adaptive Mutations in EfpR, a Dual Regulator of Virulence and Metabolic Functions in the Plant Pathogen Ralstonia solanacearum[J] . Anthony Perrier,Rémi Peyraud,David Rengel,Xavier Barlet,Emmanuel Lucasson,Jér?me Gouzy,Nemo Peeters,Stéphane Genin,Alice Guidot. PLOS Pathogens . 2016 (12)
[3]Escaping Underground Nets: Extracellular DNases Degrade Plant Extracellular Traps and Contribute to Virulence of the Plant Pathogenic Bacterium Ralstonia solanacearum[J] . Tuan Minh Tran,April MacIntyre,Martha Hawes,Caitilyn Allen. PLOS Pathogens . 2016 (6)
[4]Evaluation of biological control agents against Ralstonia wilt on ginger[J] . Wei Yang,Quan Xu,Hong-Xia Liu,Yun-Peng Wang,Yong-Ming Wang,He-Tong Yang,Jian-Hua Guo. Biological Control . 2012 (3)
[5]Host recognition and integration of filamentous phage ?RSM in the phytopathogen, Ralstonia solanacearum[J] . Ahmed Askora,Takeru Kawasaki,Shoji Usami,Makoto Fujie,Takashi Yamada. Virology . 2008 (1)
[6]Highly specific PCR-diagnosis to determine Pseudomonas solanacearum strains of different geographical origins[J] . F. Hartung,R. Werner,H.-P. Mühlbach,C. Büttner. TAG Theoretical and Applied Genetics . 1998 (6-7)
[7]Thermal asymmetric interlaced PCR: automatable amplification and sequencing of insert end fragments from P1 and YAC clones for chromosome walking[J] . Yao-Guang Liu,Robert F. Whittier. Genomics . 1995 (3)
[8]Four new derivatives of the broad-host-range cloning vector pBBR1MCS, carrying different antibiotic-resistance cassettes[J] . Michael E. Kovach,Philip H. Elzer,D. Steven Hill,Gregory T. Robertson,Michael A. Farris,R.Martin Roop,Kenneth M. Peterson. Gene . 1995 (1)
[9]Biological control of bacterial wilt caused by Pseudomonas solanacearum in India with antagonistic bacteria[J] . C. S. Anuratha,S. S. Gnanamanickam. Plant and Soil . 1990 (1)
本文编号：2894913
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