耐寒无核葡萄胚挽救种质创新研究

发布时间：2020-04-02 21:39

【摘要】：无核葡萄多属于欧亚种,品质优良,但耐寒性普遍较差,在冬季寒冷环境下易发生冻害。我国拥有丰富的抗寒野生葡萄资源,通过杂交的方式将其抗寒性与欧亚种葡萄无核-优良特性结合,利用胚挽救技术可获得新种质。本研究以30份野生葡萄资源和24个不同品种葡萄为试材,通过人工低温模拟试验,探究葡萄枝条在低温胁迫下的生理响应,建立不同葡萄品种抗寒性综合评价的方法,并以主栽欧亚种无核鲜食葡萄和抗寒性强的亲本进行田间杂交,结合胚挽救技术,获得杂种后代。通过分析不同亲本杂交组合、继代培养基类型及离体幼胚发育成苗及大田炼苗移栽定植等影响因素,旨在进一步提高无核葡萄胚挽救育种效率。对获得的杂种幼苗进行抗寒无核分子标记辅助选择,为耐寒无核葡萄育种提供具有参考价值的新材料。主要研究结果如下:(1)课题组已收集30份野生抗寒葡萄资源,根据形态学特征分为两类,通过建立资源圃的方式完成野生葡萄种质资源的安全保存。(2)运用隶属函数法建立了不同葡萄品种抗寒性综合评价的方法。24个不同葡萄品种抗寒性存在差异,强弱顺序为:双丰、河岸10号、双优、山河1号、北醇、绛县山葡萄、贝达、无核翠宝、5BB、北冰红、丽红宝、晶红宝、京亚、红地球、户太8号、S04、早康宝、早黑宝、晚黑宝、秋红宝、紫提、夏黑、红宝石无核及维多利亚。(3)杂交亲本对胚挽救效率影响较大。红宝石无核作母本进行杂交时,胚形成率达到13.7%和13.8%,而晶红宝作母本时,胚形成率仅为1.3%和0.0%;北冰红为父本进行杂交时,胚形成率分别为14.2%、13.7%及0.0%,而山河1号为父本时,分别为1.3%、1.5%、6.6%及13.8%,达到显著性差异。(4)通过叶片结构差异、气孔大小和形态、染色体数目的显微观察及分子标记技术对已获得的部分胚挽救杂种幼苗进行早期辅助选择。从红宝石无核×北冰红、丽红宝×山河1号2个组合F1代杂种共13个株系中初步鉴定出4个无核株系,2个耐寒株系;从早黑宝×红宝石无核杂交后代中鉴定获得1个三倍体株系。
【图文】：

于母本花穗柱头上方均匀抖动使其散落于柱头上，授粉完成后迅速套袋，连逡逑续授粉２ｄ。更换花粉时使用酒精擦拭镊子和手，更换脱脂棉团，防止花粉交叉污染。逡逑如图２－１所示。逡逑ｉｓ邋Ｂ逡逑图２－１葡萄去雄与授粉逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｇｒａｐｅ邋ｅｍａｓｃｕｌａｔｉｎｇ邋ａｎｄ邋ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ逡逑注：ａ：葡萄人工去雄；ｂ：喷水去除残留花粉；ｃ：葡萄去雄后套袋标记；ｄ：母本最佳授粉时机；ｅ：逡逑人工授粉；ｆ：授粉后３ｄ。逡逑Ｎｏｔｅ：邋ａ：邋Ｇｒａｐｅ邋ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ邋ｅｍａｓｃｕｌａｔｉｏｎ；邋ｂ：邋Ｗａｔｅｒ邋ｓｐｒａｙ邋ｔｏ邋ｒｅｍｏｖｅ邋ｒｅｓｉｄｕａｌ邋ｐｏｌｌｅｎ；邋ｃ：邋Ｇｒａｐｅ邋ｂａｇｓ邋ｌａｂｅｌｅｄ邋ａｆｔｅｒ逡逑ｅｍａｓｃｕｌａｔｉｎｇ；邋ｄ：邋Ｏｐｔｉｍｕｍ邋ｔｉｍｉｎｇ邋ｏｆ邋ｆｅｍａｌｅ邋ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ；邋ｅ：邋Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ邋ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ；邋ｆ：邋３邋ｄａｙｓ邋ａｆｔｅｒ邋ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ．逡逑２．５．８葡萄胚挽救程序逡逑胚挽救杂交幼果的采集工作于６？７月进行，采集不同发育时期的杂交幼果，，带回山逡逑西农业大学园艺学院实验室，杂交幼果采集时间以杂交最后一次授粉日期开始计算。在逡逑超净工作台中使用７５％乙醇浸泡３０邋ｓ，无菌水冲洗３次，再用０．２％的升汞溶液浸泡２０逡逑ｍｉｎ，无菌水冲洗３次，期间来回震荡３？５次，以保证充分灭菌。将幼果中胚珠剥离，逡逑将长度＞２邋ｍｍ的胚珠接种至胚形成培养基中，每个三角瓶中接种２０个胚珠左右，进行逡逑避光培养。胚珠培养约９周后，在解剖镜下纵切胚珠，于喙部挑出白色胚接种值胚萌发逡逑培养基中

葡萄种子,沙藏

r>邋＿逡逑Ｌ、，Ｊ＿灥，~栧义贤迹玻参藓似咸雅咄炀瘸擅珏义希疲椋纾玻插澹樱澹澹洌欤澹螅箦澹纾颍幔穑邋澹澹恚猓颍镥澹颍澹螅悖酰椋睿珏澹椋睿簦镥澹穑欤幔睿簦箦义献ⅲ海幔喝斯とバ酆蟮幕▃i；ｂ：剥离胚珠；ｃ：胚珠培养；ｄ：经离体培养胚珠内的幼胚（箭头指示）；逡逑ｅ？ｆ：胚萌发；ｇ？ｉ：胚发育成苗。标尺为１邋ｍｍ。逡逑Ｎｏｔｅ邋：邋ａ：邋Ｅｍａｓｃｕｌａｔｉｏｎ；邋ｂ：邋ｔｈｅ邋ｏｖｕｌｅ邋ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ；邋ｃ：邋Ｏｖｕｌｅｓ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｉｎ邋ｍｅｄｉｕｍ；邋ｄ：邋Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ邋ｅｍｂｒｙｏ逡逑（ａｒｒｏｗ）邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｏｖｕｌｅ；邋ｇ￣ｉ：邋Ｅｍｂｒｙｏ邋ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ邋ｉｎｔｏ邋ｐｌａｎｔｓ．邋Ｂａｒｓ邋ａｒｅ邋１邋ｍｍ．逡逑２．５．９不同葡萄品种种子沙藏与播种逡逑参照王庆莲［ｌｗ］等方法进行。种子层积试验于２０１６年１１月１５邋Ｒ于山西农业大学园逡逑艺教学试验站（Ｎ３７°２５＇４４〃，Ｅ１１２°３４＇５３＂，海拔７７３．３４邋ｍ）进行。参试葡萄品种为北冰逡逑红、户太８号及户太８号ｘ北冰红杂利１邋Ｆ１邋0逦逡逑图２－３葡萄种子沙藏逡逑Ｆｉｇ．２－３邋Ｇｒａｐｅ邋ｓｅｅｄｓ邋ｓｔｒａｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ逡逑注．？邋ａ：园土与河沙＝１：邋１，湿度适宜；ｂ－ｃ：将葡萄种子放入尼龙袋中，置于装有沙藏介质的瓦盆中；逡逑山盖砖封盆。逡逑Ｎｏｔｅ：邋ａ：邋Ｍｉｘｉｎｇ邋ｔｈｅ邋ｇａｒｄｅｎ邋ｓｏｉｌ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｅ邋ｒｉｖｅｒ邋ｓａｎｄ邋１：１
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S663.1

【相似文献】