云杉矮槲寄生快速分子检测方法的建立及应用

发布时间：2024-03-10 21:37

　　云杉矮槲寄生作为一种寄生在云杉上的寄生性种子植物,已成为三江源地区云杉林的毁灭性病害,其危害性之大、潜育期之长及侵染特点复杂等妨碍了云杉矮槲寄生的防治。为了实现云杉矮槲寄生害的早期诊断、证实云杉矮槲寄生的系统侵染特点,为云杉苗木的栽培调运和云杉矮槲寄生的防治提供技术支持,本文基于Real-TimePCR和环介导等温扩增技术(LAMP)方法,建立了云杉矮槲寄生的快速、灵敏的检测方法,通过对田间样品的检测初步证实云杉矮槲寄生的系统侵染特点以及在寄主体内与寄主枝条是否发生同步生长,为云杉矮槲寄生害的防治提供参考。1、比对云杉矮槲寄生与其寄主云杉的序列,基于Real-Time PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)两种方法分别设计云杉矮槲寄生的特异性引物,通过对反应体系和反应条件的优化,建立了Real-Time PCR和LAMP两种云杉矮槲寄生的分子检测方法。Real-Time PCR技术检测云杉矮槲寄生自动化程度高、能有效避免污染；LAMP技术操作简单,不需要特定的仪器设备,结果可根据羟基萘酚蓝(HNB)的显色反应判定,比较适合在基层的推广。2、为了检测Real-Time PCR和LAMP引...

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．２．１－２?ＰＣＲ的灵敏度试验??Ｆｉｇ?２．２．１－２?Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｏｆ?ＬＡＭＰ??

云杉矮槪寄生快速分子检测方法的建立及应用??丄４?ＰＣＲ引物的灵敏性检测??为了检验ＰＣＲ反应的灵敏性，将云杉矮搬寄生的ＤＮＡ进行梯度稀１、１０°、１０－１、１０－２、１０－３、１０＂＼?１０－５、ｌＯ＇＾、１０－７、１０－８、１〇－９１巧／叫＾等多ＰＣ民反应，根据电泳图结果表明....

图２．２．２－１?ＲｅａＫＴｉｍｅ?ＰＣＲ特异性检测结果??Ｆｉｇ２．２．２－１?Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ?ｏｆ?民ｅａｌ－Ｔｉｍｅ?ＰＣ民??

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图２．２．２－１?ＬＡＭＰ引物筛选试验??Ｈｇ?２．２．２－１?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬＡＭＰ?ｐｒｉｍｅｒｓ??＝ｒｒ＝１１４＝云１２５＝

图２．２．２－１?ＬＡＭＰ引物筛选试验??Ｈｇ?２．２．２－１?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬＡＭＰ?ｐｒｉｍｅｒｓ??Ｍ＝ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；?１，４，７，１０，１３＝云杉矮撫［寄生；２，５，８，１１，１４＝健康青海云杉；３，６，９，１２，１５＝空白对照。??注：ａ图....

图２．２．２－２ＬＡＭＰ引物结构示意图??Ｆｉｇ?２．２．２－２?Ｄｅｓｉｇｎ?ｏｆ?ＬＡＭＰ?ｐｒｉｍｅｒｓ??（ａ）云杉矮懈寄生叶緑体基因目标区域序列比对

ａ?Ｉ?１?１?１?１?１?１??Ｍｍｍ?ＷＰ／１Ｗ?２－ＲＰ／２－６ＩＰ／?？＾Ｐ／３－ＢＩＰ?４－ＲＰ／４－ＢＩＰ?Ｓ－ＲＰ／Ｓ－ＢＩＦ??１－Ｆ３／１－Ｂ３?２－Ｆ３／３－Ｂ３?３－ｆ３／３－Ｂ３?４－Ｆ３／４－Ｂ３?５－Ｆ３／Ｓ－Ｂ３??Ｈ＾＾ＶＨＢＷＷＶＨＶＰＷＭＫ＾ａ....

本文编号：3925355