球形赖氨酸芽孢杆菌合成纳米银蛋白分离纯化及鉴定

发布时间：2021-04-13 07:17

　　金属纳米材料是纳米材料的一个重要分支,它以贵金属金、银、铜为代表,其中纳米银的研究结果最多。随着绿色、环保观念的普及,利用生物系统合成纳米银粒子的生物法备受关注。在生物分子的保护下,纳米银的稳定性和分散性得到了较大提高,具有良好的生物相容性、特殊的理化性质及优异的抗菌、抗炎作用和较低的生物毒性,在生物医用材料领域内具有独特的优势和举足轻重的地位。深入研究生物制备纳米银的合成机制,对于制备更加高效、形貌可控、性质稳定的抗菌纳米银产品意义重大。本论文通过预实验发现,球形赖氨酸芽孢杆菌Lysinibacillus sphaericus（L.sphaericus）的发酵液经离心除菌后的上清可诱导合成纳米银,因该菌发酵液上清主要成分为胞外分泌蛋白,故推测纳米银合成机理可能与L.sphaericus发酵液上清中的某类蛋白或某几类蛋白的协同作用有关。本研究首先对L.sphaericus进行活化和发酵培养,将其发酵菌液采用离心除菌体、盐析、离子交换层析等方法进行分离纯化,最终从L.sphaericus发酵液上清中成功分离出具有高效合成纳米银能力的纯化蛋白——纳米银合成蛋白。该蛋白大小约为115 k D... 

【文章来源】：淮阴工学院江苏省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

BSA标准曲线

淮阴工学院硕士学位论文182.3实验结果与讨论2.3.1发酵液上清的初步纯化实验菌株的发酵液和发酵液上清经测定，pH值均在7.5左右。发酵液上清经过各组不同饱和度（20%、40%、50%、60%、70%、80%、90%）下的盐析，将各组获得的沉淀上清，分别测定OD值并通过BSA标准曲线获得蛋白含量。以不同饱和度（X）为横坐标，沉淀上清中蛋白含量为纵坐标（Y）绘制盐析曲线，如图2.2所示。图2.2硫酸铵盐析曲线Fig.2.2Ammoniumsulfatesaltingoutcurve由图2.2可知，在饱和度20～90%范围内，盐析沉淀上清液中的蛋白含量随饱和度的增加而下降，当饱和度增大到80%之后，沉淀上清中残留的蛋白含量已经很低了，换言之，即发酵液上清中绝大多数蛋白均已析出，通过离心聚集在盐析沉淀中，实验分离的目标蛋白很有可能也在其中。将盐析获得的各组沉淀蛋白溶解后进行过夜透析，得到各组饱和度下的透析蛋白液。利用紫外分光光度计测出各饱和度下沉淀蛋白和透析蛋白（蛋白液均稀释10倍后测定）的OD值，根据BSA标曲得到各饱和度下沉淀蛋白和透析蛋白的含量。连同之前测得的沉淀上清蛋白含量一并记录于下表2.6所示。

淮阴工学院硕士学位论文20图2.3不同饱和度下透析蛋白溶液合成AgNPs颜色变化（A）；各组饱和度下透析蛋白液AgNPs合成峰图（B）Fig.2.3ColorchangeofsyntheticAgNPsindialysisproteinsolutionobtainedunderdifferentsaturation(A);PeakgraphsofAgNPssynthesisofdialysisproteinsolutionateachgroupsaturation(B)将80%饱和度下所得透析液进行SDS-PAGE凝胶电泳，根据条带数目确定目前透析蛋白液的纯度，如图2.4可知，该透析液所含蛋白质种类较多，各蛋白分子量大小分布在40～115kDa，后面还需选择合适的填料进行离子交换树脂层析，进一步分离纯化目的蛋白。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Green synthesis, antimicrobial and cytotoxic effects of silver nanoparticles mediated by Eucalyptus camaldulensis leaf extract[J]. Afrah Eltayeb Mohammed.  Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 2015(05)
[2]纳米银催化的甲烷选择还原NO反应研究[J]. 石川,程谟杰,曲振平,包信和.  复旦学报(自然科学版). 2002(03)

博士论文
[1]生物合成纳米材料的制备、表征及环境行为研究[D]. 火灿.华北电力大学(北京) 2019

硕士论文
[1]利用细菌介导制备纳米银的研究[D]. 熊文.东北林业大学 2015



本文编号：3134866